Ⅰ 細菌葯敏實驗的操作步驟
培養皿上十字劃線（待檢細菌）--塗布均勻（注意，邊緣要塗，以免影響抑菌圈的性狀完整性）--放葯片（最好十字線交叉處一片、十字線上的四條短線每條一片，這四片之間以及與中央處的那片距離適中，大概不少於25mm，有字面朝上，都沒字在培養皿背面註明葯名）--恆溫箱培養約24h--觀察抑菌圈的邊緣是否清晰，抑菌圈直徑--記錄
記得不太清楚了，僅供參考
Ⅱ 細菌葯敏實驗有何臨床意義
篩選出細菌的敏感抗菌葯物、指導臨床用葯、防止細菌產生耐葯性。
Ⅲ 葯物敏感試驗的介紹
葯物敏感試驗簡稱葯敏試驗（或耐葯試驗）。旨在了解病原微生物對各種抗生素的敏感（或耐受）程度，以指導臨床合理選用抗生素葯物的微生物學試驗。一種抗生素如果以很小的劑量便可抑制、殺滅致病菌，則稱該種致病菌對該抗生素「敏感」。反之，則稱為「不敏感」或「耐葯」。為了解致病菌對哪種抗菌素敏感，以合理用葯，減少盲目性，往往應進行葯敏試驗。其大致方法是：從病人的感染部位採取含致病菌的標本，接種在適當的培養基上，於一定條件下培養；同時將分別沾有一定量各種抗生素的紙片貼在培養基表面（或用不銹鋼圈，內放定量抗生素溶液），培養一定時間後觀察結果。由於致病菌對各種抗生素的敏感程度不同，在葯物紙片周圍便出現不同大小的抑制病菌生長而形成的「空圈」，稱為抑菌圈。抑菌圈大小與致病菌對各種抗生素的敏感程度成正比關系。於是可以根據試驗結果有針對性地選用抗生素。近年已有自動化的葯敏試驗儀器問世，使試驗更加迅速、准確。目前濫用抗生素，致使抗葯菌增加，甚至因長期大量使用廣譜抗生素，殺傷體內正常微生物，失去微生物的相互制約作用，從而使一些少見的或一般情況下的非致病菌大量繁殖，引起所謂「二次感染」的情況屢有發生，給治療造成人為的困難。因此，提倡使用葯敏試驗，堅持合理用葯十分重要。
Ⅳ 葯敏試驗的實驗步驟
普通營養瓊脂培養基：可去生化試劑店購買，做不同細菌的葯敏試驗可選擇不同的培養基，如做大腸桿菌的葯敏試驗可選擇普通營養瓊脂或麥糠凱培養基。做沙門氏菌可選擇血清培養基。
葯敏試紙：購買或自製（詳見實驗准備）
細菌：待做葯敏試驗的細菌
儀器：接種環、酒精燈、打孔器、牛津杯、移液器、滴頭 2.1葯敏片的准備：購買或自製
2.1.1制備方法：取新華1號定性濾紙，用打孔機打成6毫米直徑的圓形小紙片。取圓紙片50片放入清潔乾燥的青黴素空瓶中，瓶口以單層牛皮紙包紮。經15磅15-20分鍾高壓消毒後，放在37℃溫箱或烘箱中數天，使完全乾燥。
2.1.2抗菌葯紙片製作：在上述含有50片紙片的青黴素瓶內加入葯液0.25毫升，並翻動紙片，使各紙片充分浸透葯液，翻動紙片時不能將紙片搗爛。同時在瓶口上記錄葯物名稱，放37℃溫箱內過夜，乾燥後即密蓋，如有條件可真空乾燥。切勿受潮，置陰暗乾燥處存放，有效期3-6個月。
2.2葯液的制備（用於商品葯的試驗）：按商品葯的使用治療量的比例配製葯液；如商品葯百病消按其說明量治療量0.01%飲水，可按這個比例配製葯液，可取10毫克加入10毫升的水中混勻。此稀釋液即為用於做葯敏試驗的葯液。 3.1葯敏片法
3.1.1在「超凈台」中，用經（酒精燈）火焰滅菌的接種環挑取適量細菌培養物，以劃線方式將細菌塗布到平皿培養基上。具體方式；用滅菌接種環取適量細菌分別在平皿邊緣相對四點塗菌，以每點開始劃線塗菌至平皿的1/2。然後，找到第二點劃線至平皿的1/2，依次劃線，直至細菌均勻密布於平皿。（另：可挑取待試細菌於少量生理鹽水中製成細菌混懸液，用滅菌棉拭子將待檢細菌混懸液塗布於平皿培養基表面。要求塗布均勻緻密，直接懸液法要把菌液濃度用生理鹽水或PBS調到0.5個麥氏標准再塗布均勻。）
3.1.2將鑷子於酒精燈火焰滅菌後略停，取葯敏片貼到平皿培養基表面。為了使葯敏片與培養基緊密相貼，可用鑷子輕按幾下葯敏片。為了使能准確的觀察結果，要求葯敏片能有規律的分布於平皿培養基上；一般可在平皿中央貼一片，外周可等距離貼若乾片（外周一般可貼七片），每種葯敏片的名稱要記住。
3.1.3將平皿培養基置於37℃溫箱中培養24小時後，觀察效果。
3.2牛津杯法
3.2.1在「超凈台」中，用經（酒精燈）火焰滅菌的接種環挑取適量細菌培養物，以劃線方式將細菌塗布到平皿培養基上。具體方式；用滅菌接種環取適量細菌分別在平皿邊緣相對四點塗菌，以每點開始劃線塗菌至平皿的1/2。然後，找到第二點劃線至平皿的1/2，依次劃線，直至細菌均勻密布於平皿。（另：可挑取待試細菌於少量生理鹽水中製成細菌混懸液，用滅菌棉拭子將待檢細菌混懸液塗布於平皿培養基表面。要求塗布均勻緻密。）
3.2.2以無菌操作將滅菌的不銹鋼小管（內徑6nm、外徑8nm、高10nm的圓形小管，管的兩端要光滑，也可用玻璃管、瓷管），放置在培養基上，輕輕加壓，使其與培養基接觸無空隙，並在小管處標記各種葯物名稱。每個平板可放4-6支小管。待分鍾後，分別向各小管中滴加一定數量的各種葯液，勿使其外溢。置37℃培養8-18小時，觀察結果。
3.2.3將平皿培養基置於37℃溫箱中培養24小時後，觀察效果。
3.3打孔法：
該法較簡單，成本低，易操作，比較適用於商品葯物的檢測。
3.3.1在「超凈台」中，用經（酒精燈）火焰滅菌的接種環挑取適量細菌培養物，以劃線方式將細菌塗布到平皿培養基上。具體方式；用滅菌接種環取適量細菌分別在平皿邊緣相對四點塗菌，以每點開始劃線塗菌至平皿的1/2。然後，找到第二點劃線至平皿的1/2，依次劃線，直至細菌均勻密布於平皿。（另：可挑取待試細菌於少量生理鹽水中製成細菌混懸液，用滅菌棉拭子將待檢細菌混懸液塗布於平皿培養基表面。要求塗布均勻緻密。）
3.3.2以無菌操作將滅菌的不銹鋼小管（外徑為4毫米、孔徑與孔距均為3毫米，管的兩端要光滑，也可用玻璃管、瓷管），放置在培養基上打孔，將孔中的培養基用針頭挑出，並以火焰封底，使培養基能充分的與平皿融合（以防葯液滲漏，影響結果）。
3.3.3加樣：按不同葯液加樣，樣品加至滿而不溢為止。
3.3.4將平皿培養基置於37℃溫箱中培養24小時後，觀察效果。
Ⅳ 細菌對抗生素敏感試驗
葯物中以多粘菌素B或粘菌素最有效，慶大黴素次之，可配成多粘菌素B或粘菌素5萬單位／毫升、0.4%慶大黴素、5%磺胺滅膿（sulfamylon）液，急性期每15～30分鍾點眼1次，同時可結膜下注射多粘菌素B，每次5～10萬單位，多粘菌素17萬單位；慶大黴素2～4萬單位，可有效控制感染。當細菌培養轉為陰性後，為防止復發，上述用葯還應持續1～2周。局部治療的同時，全身可肌注多粘菌素B或粘菌素，每日12.5毫克／kg體重。為防止和控制Gram陽性菌的混合感染，尚須用其他廣譜抗生素，如桿菌肽，新黴素、妥布黴素等。